蛋白质的提取和制备蛋白质的种类很多，其性质也有很大差异。即使是同一类蛋白质，由于所用材料不同，使用方法也有很大差异，而且处于不同的系统中。因此，不可能有固定的程序。分离各种类型的蛋白质。本文分别介绍了从新鲜样品中提取总蛋白和从裂解液中分离总蛋白的方法和步骤，以供参考。
01
从新鲜样品中提取总蛋白（简单方法）
1.自制裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl、2 mM EDTA、100 mM NaCl、0.5% X-100，调节pH至8.5-9.0，备用；使用前添加100μg/ml
溶菌酶，蛋白酶抑制剂 PMSF，浓度为 1 μl/ml。裂解液用量为10-50ml裂解液/1g湿菌体。
2. 40ml菌液4℃离心15分钟收集菌体。将沉淀物悬浮并用PBS洗涤两次。向沉淀中加入 1ml 裂解液，使细菌细胞悬浮。
3、超声波破碎，使用300w，10s超声波/10s间隔，超声波20分钟，重复冻融超声波3次，直至菌液变澄清或变色。
4. 1000g 离心去除大碎片。上清液可直接变性并进行PAGE电泳检测，或用1% SDS溶液透析并冷冻。
缺点：结果表明疏水性跨膜蛋白的提取效率有限。
超声波研磨机
02
从裂解物中分离总蛋白
1. 将溶解的样品研磨粉碎后，加入氯分层，2-8℃离心15分钟。上层水相用于RNA提取，体积约占总体积的60%。
2. 用乙醇沉淀中层和有机相中的DNA。每使用1ml，加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2-8℃，不超过2000g离心5分钟。
3. 将上清液转移至新的 EP 管中，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml，加入1.5ml异丙醇，室温放置10分钟，2-8℃离心10分钟，弃上清。
4.用含有0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤。每1ml加入2ml洗涤液，室温放置20分钟，2-8℃7500g离心5分钟，弃上清，重复洗涤两次。最后加入2ml无水乙醇，涡旋，室温放置20分钟，2-8℃7500g离心5分钟，弃上清。
5、冻干5-10分钟，溶解于1%SDS溶液中，反复移液，50℃水浴至完全溶解，2-8℃离心10分钟，除去不溶物。
6.替代方案：将3中酚醇上清液转移至小分子量透析袋中，在2-8℃下于1%SDS溶液中透析3次，1000g离心10分钟去除沉淀。上清液可直接用于蛋白质实验。