了解菌体浓度测定方法:直接计数法及其特点与计算方法

日期: 2024-09-12 01:06:06|浏览: 49|编号: 65034

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细菌浓度是指单位体积培养基中细菌的含量。常用的测定细菌浓度的方法(细菌计数法)主要有以下几种:

1.直接计数法

这是一个很简单的检测方法,我们可以用计数板或者计数仪直接得到细菌的数量。

1.1 细菌计数板

首先制备菌悬液,取一定体积的样品菌悬液置于细菌计数板计数板上,在显微镜下观察计数,根据计数板计数板上的细菌数,计算出样品中细菌的数量。

特点:所需设备简单,检测结果比较准确,能快速得出结果,计数的同时可观察所研究微生物的形态特征。不能区分是否是细菌,也不能区分活菌与死菌。

单位:个/mL

计算方法:

(1)25×16计数板:

每毫升细菌数=(100个细胞中的细胞数/100)×400×1000×稀释倍数

(2)16×25计数板:

每毫升细菌数=(80个细胞中的细胞数/80)×400×1000×稀释倍数

1.2 电子计数器计数方式

电子计数器也属于直接计数法,它的工作原理与血细胞分析仪类似,测量小孔中液体的电阻变化,小孔只能通过一个细菌,当一个细菌通过这个小孔时,电阻明显增大,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。

计数单位:个/mL

特点:此方法结果比较准确,但只能识别粒径,无法区分是否为细菌,因此要求菌悬液中不含任何杂物。

2. 活菌计数法

常用的方法是平板菌落计数法(CFU法),其原理是每种活菌在适宜的培养基和良好的生长条件下,都能生长形成菌落。取一定体积的菌悬液,做几个不同的10倍递增稀释度,然后从每个稀释度中取1mL置于无菌平皿中,与营养琼脂培养基混合。在一定温度下培养一定时间(一般为48小时)后,记录每皿形成的菌落数,并根据稀释倍数计算出原样每mL中所含的活菌总数。

特点:此方法灵敏度高,是临床微生物检测中最常用的活菌计数方法,前两种方法对活菌和死菌均进行计数,而此方法只对活菌进行计数。

计数单位:cfu/mL(cfu是菌落形成单位,是指单个细菌或多个细菌聚集成群在固体培养基上生长繁殖所形成的菌落,称为菌落形成单位,是计算细菌或霉菌数量的单位。cfu/mL是指每毫升样品中所含的细菌菌落总数。菌落形成单位的计数方法与前两种计数方法不同,前两种方法会将所有活菌和死菌都算上,而此方法将活菌计算在内)。

3. 浊度法

浊度测定法又称浊度测定法,是一种通过测量光穿过悬浮颗粒介质的强度来确定悬浮物浓度的方法。这是一种光散射测量技术。常用的方法有:

3.1 麦克法兰比浊法

发明了用于微生物浊度测定的不同浊度的标准浊度管,具体配制方法是通过硫酸与氯化苯甲醇的配比来确定的。

将0.5 ml氯化苄(1.17%)加入99.5 ml硫酸(1%)中,所得溶液的浊度为0.5麦克法兰单位。0.5麦克法兰浓度​​菌液是临床微生物药敏试验中常用的浓度,一般认为,将配制好的菌液浓度配制成0.5麦克法兰比浊管时,相当于1.5×108个细菌/mL。

您可以自行配制麦克法兰比浊管,也可以购买市售的标准麦克法兰比浊管,将配制好的菌悬液与标准麦克法兰比浊管进行比较,菌悬液的麦克法兰浓度​​与标准麦克法兰比浊管的浊度相同。

特点:该方法实际上是一种目视浊度法,利用肉眼观察浊度,误差较大。

单位:mcf(McF浊度单位)。

3.2 麦克法兰浊度仪

它是采用麦克法兰浊度法的自动化分析仪器,凭借其灵敏、准确、快速等优点,已逐渐取代手工法,成为细菌浊度测定的主要工具。麦克法兰浊度仪测量细菌溶液样品,直接显示麦克法兰单位浊度值,可根据国际通用的麦克法兰单位浊度值与细菌数量的关系换算出细菌浓度。

特点:简便快速,但只能检测含有大量细菌的悬浮液并得到细菌的相对数量。此方法不能用于测量颜色太深的样品。

单位:mcf(McF浊度单位)。

3.3 光电比浊法

当光束通过悬浮液时,由于散射或吸收,其透过率降低。菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,与透过率成反比。这是光电比浊法的基础。常用的方法是分光光度计法。

特点:此法简便、快速,但只能检测含有大量细菌的悬浮液并得到细菌的相对数量。对于颜色太深的样品不能使用此法。

单位:OD值(光密度)。

4. 重量法

此法又分为干重法和湿重法。此法又分为湿重法和干重法。湿重法是将单位体积培养物离心后,称量湿菌;干重法是将单位体积培养物离心后,用清水洗净,放入干燥器中加热干燥,使其失水后再称量。

特点:该方法适用于细菌浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长的常用方法。

单位:毫克/毫升

5. 测定细胞的总氮或碳含量

氮和碳是细胞的主要成分,其含量比较稳定,测定氮、碳的含量可以推断细胞的质量。

特点:该方法适用于细胞浓度较高的样品。

6.换色单元(CCU)

CCU即颜色变化单位,是以培养基中微生物的代谢活性作为指标,根据培养基颜色的变化来计数微生物数量的单位。

以解脲支原体为例:

1. 取12个无菌试管,每管加入1.8 mL解脲支原体培养基。

2. 在第一管中加入0.2 mL解脲支原体溶液,充分混匀后,再吸取0.2 mL于第二管中,依此类推,做10倍梯度稀释,直至最后一管。

3、37℃培养,以最后一管培养基变色为供试菌液的CCU,即支原体的最大代谢活力,如第六管变色,其相对浓度为10的6次方CCU/mL,即/mL。

特点:此法通常用于一般比浊法无法计数的极微小的微生物,如支原体,因为支原体的液体培养完全透明,呈现澄清透明的红色,所以不能用比浊法计数;又因为支原体固体培养十分困难,不易用CFU法计数,所以需采用特殊的计数方法,即CCU法。

单位:ccu/mL

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