细菌数测定方法 1.计数器测定法：即用血球计计数。取一定体积的样品细胞悬液，置于血球计的计数室中，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm3），所以根据计数器刻度上的细菌数，便可计算出样品中的细菌数。此法简便易行，可立即得到结果。此法不仅适用于细菌计数，也适用于酵母菌、霉菌孢子计数。 2.电子计数器计数法：电子计数器的工作原理是测量小孔中液体的电阻变化。小孔只能通过一个细胞，当一个细胞通过此小孔时，电阻明显增大，形成脉冲，自动记录在电子记录装置上。此法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，却不能区分是否是细菌。因此要求菌悬液中不含任何杂物。3、活菌计数常用的方法是平板菌落计数法，该方法是根据每个活菌都能长出一个菌落的原理设计的。取一定体积的菌悬液，作一系列倍数稀释，再将定量的稀释液培养在平板上，根据培养出的菌落数，便可计算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是检测污染活菌数量的方法，也是目前世界上许多国家采用的方法。使用此法时应注意以下几点：①一般选用菌落数在30～300个之间的平板进行计数，过多或过少都不准确；②为防止菌落蔓延影响计数，可在培养基中加入0.001％的2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）； ③该方法仅限于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食品、药品等多种物质的细菌检测，是计数活菌最常用的方法。 4.浊度法 浊度法是根据菌悬液的透光度，间接地确定细菌数量的。菌悬液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，因此可以用光电比色计测定菌液，以光密度（OD值）来表示样品菌液的浓度。此法简便、快速，但只能检测含大量细菌的悬液，并得到细菌的相对数量，颜色太深的样品无法用此法测定。 5.菌体重量测定法 此法分为湿重法和干重法，湿重法是将单位体积的培养物离心后，称量出湿菌；干重法是将单位体积的培养物离心后，用清水洗净，放入干燥器中，加热干燥，使其失水然后称重。此法适用于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长情况的常用方法。 6.细胞中总氮或碳含量的测定 氮和碳是细胞的主要成分，其含量比较稳定，测定氮、碳含量可以推断细胞的质量，此法适用于细胞浓度较高的样品。 7.变色单位法（简称CCU） 此法通常用于一般比浊法无法计数的极微小的微生物，如支原体，因为支原体的液体培养物完全透明，呈现澄清透明的红色，所以不能用比浊法计数。由于支原体固体培养十分困难，不易于用CFU法进行计数，因此需要一种特殊的计数方法，即CCU法。
它是以培养基中微生物的代谢活性为指标，计数微生物的相对含量。下面以解脲支原体为例简单介绍一下它的操作：（1）取12支无菌试管，每支装有1.8毫升解脲支原体培养基。（2）在第一支管中加入0.2毫升解脲支原体培养基，充分混匀后，再从中取0.2毫升加入到第二支管中。依此类推，10倍梯度稀释，直至最后一支管。（3）37度培养。最后一支培养基颜色发生变化的管即为待测培养基的CCU，即支原体的最大代谢活性。比如第六支管颜色发生变化，则其相对浓度为10的6次方CCU/ml。一般来说，比浊法和菌落计数法都可以满足大多数细菌的计数，但对于支原体等特殊的微生物，CCU法更为适用。 测定微生物生长的方法有很多，每种方法都有其优缺点，并不是在所有情况下都适用。在微生物学工作中，一般使用平板菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法更适合你，要根据你的具体情况而定。 分离与纯化 1.目标要求 掌握倾注平板法和常用分离纯化的几种基本操作技术。 2.基本原理 从混合的微生物种群中仅获得某一类型或菌株的微生物的过程称为微生物的分离纯化。本实验采用平板分离法： 该方法操作简便，在微生物的分离纯化中应用广泛。它包括两个方面：1、选择适合于所要分离微生物的生长条件或加入一些抑制剂，造成只有利于该微生物生长、抑制其它微生物生长的环境，从而消除一些不必要的微生物；2、微生物在固体培养基中生长形成的单菌落可以是繁殖出来的细胞的集合，因此挑取单菌落即可得到纯培养物。
获取单个菌落的方法可用稀释、涂片或划线计数的方法来完成。纯培养的测定：1、确定其菌落的观察特征；2、结合镜检，确定个体的形态特征。三、设备1、菌种黑曲霉；2、培养基Gower氏Ⅰ培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、氏琼脂培养基、Chad氏琼脂培养基；3、溶液或试剂10％苯酚，含9ml无菌水的试管，含90ml无菌水及玻璃珠的锥形瓶，4％水琼脂；4、仪器或其他用具无菌玻璃涂片棒、无菌吸量管、接种环、无菌培养皿、链霉素及土壤样品、显微镜、血细胞计数板等。四、操作步骤1、稀释与涂板法（1）倒板，将肉浸膏蛋白胨琼脂培养基、Gower's Ⅰ琼脂培养基和's琼脂培养基加热溶化，待冷至55~60℃，在Gower's Ⅰ琼脂培养基中加入数滴10%苯酚，在's琼脂培养基中加入链霉素溶液，混匀后分别倒进平皿，每种培养基倒三皿；（2）配制土壤稀释液称取10g土样，放入盛有90ml无菌水及玻璃珠的锥形瓶中。振荡约20分钟，使土样与水混合，细胞分散。用1ml无菌吸量管从中吸取1ml土壤悬浮液，加入到盛有9ml无菌水的大试管中，充分混匀。然后用无菌吸量管从此试管中吸取1ml加入到另一含有9ml无菌水的试管中，混匀，再配制10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液； (3)摊铺：用记号笔将10-4、10-5、10-6三个稀释度写在每个培养基的三块平板表面，然后用无菌吸量管分别取10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中0.1ml放入标记的室温下放置5-10分钟，让菌液吸收到培养基中； （4）培养：将Gould I琼脂培养基平板和氏琼脂培养基平板倒置在28℃温室中培养3-5天，将肉膏蛋白胨平板倒置在37℃温室中培养2-3天；（5）挑取菌落：从培养后长出的单菌落中挑取数个细胞接种在上述三种培养基的斜面上，分别在28℃和37℃温室中培养，待长出大菌苔后检查其性状是否一致，同时将细胞涂片染色后在显微镜下检查是否为单个微生物。
若发现外来菌，则需再次分离纯化，直至获得纯培养物。 2 平板划线分离法 (1)按稀释度涂板法倒平板，用记号笔标明培养基名称、土样号及实验日期； (2)靠近火焰，左手握住平板底部，右手握住接种环，取一环上述土样悬浮液划线于平板上。划线的方法有多种，但无论用哪种方法，目的都是用划线法将平板上的样品稀释，形成单个菌落； (3)挑取菌落，稀释平板法，直至分离出的微生物才算纯净。 库克菌的检测方法 耐酸耐热菌检测方法（库克） 1 适用范围 本方法适用于清汁、浑汁、水及浓缩汁中耐酸耐热菌的检测。 2 仪器与试剂 2.1 恒温水浴：80±1℃。 2.2 恒温培养箱：40±1℃。 2.3 无菌培养皿：直径90mm。 2.4 无菌试管：18×180mm。 2.5 滤膜：0.45um水基一次性滤膜。 2.6 酵母粉。 2.7 蛋白胨。 2.8 琼脂粉。 2.9 葡萄糖。 2.10 吐温-80。 2.11 12.5％苹果酸。 2.12 无菌蒸馏水。 2.13 K's培养基平板：将500ml蒸馏水放入锥形瓶中，加入酵母粉1.25g、蛋白胨2.50g、琼脂粉6.50g、葡萄糖0.5g、吐温800.5ml，溶解后，轻轻盖上锥形瓶盖，121℃灭菌25分钟；在小烧杯中加入10ml蒸馏水和1.25g苹果酸，搅拌至溶解，用0.45um滤膜过滤苹果酸水溶液，将处理过的苹果酸水溶液加入已灭菌的K's培养基中，搅拌均匀，使其pH值达到3.7±0.1。
待冷却至50℃左右时将K培养基倒入培养皿中，凝固后置0～5℃冰箱保存，有效期60天。记录配制日期。3 操作步骤3.1样品处理3.1.1浓缩汁：开启水浴，调温至80±1℃。无菌操作，取10ml浓缩汁于15ml无菌试管中，再将10ml浓缩汁转移至另一带有温度计控温的15mL试管中，盖好样品试管盖。将上述样品试管和控温试管放入水浴中，当温度达到80±1℃时开始计时，维持13分钟（计时器）。冷却至室温，将热处理后的样品转移至盛有90～100ml无菌蒸馏水的无菌容器中，摇匀。将稀释的样品溶液用0.45um滤膜真空过滤。3.1.2清汁、水：开启水浴，调节温度至80±1℃。无菌操作，取150ml清汁（或水）于已灭菌的玻璃样品瓶中，再将150ml清汁（或水）转移于另一带有温度计控温的玻璃样品瓶中，盖上样品瓶。将上述样品管和控温管放入水浴中，当温度达到80±1℃时开始计时，维持13分钟（用计时器）。将热处理后的样品冷却至室温，用0.45um滤膜真空过滤。3.1.3浑浊汁：开启水浴，调节温度至80±1℃。
无菌操作取20ml浑浊汁于一支无菌试管中，再将20ml浑浊汁转移至另一支带有温度计控温的20mL试管中，盖上取样试管盖。将上述取样试管和控温试管置于水浴中，待温度达到80±1℃时开始计时，维持13分钟（用计时器计数）。冷却至室温，用0.45um滤膜将热处理后的样品真空过滤。3.2培养与计数取下过滤器上部装置，用无菌镊子将滤膜从过滤器上取下置于K氏培养基上，轻拍数次，确保滤膜与培养基接触。倒置在40～41℃恒温培养箱中，在恒温培养箱底部放置一个装有水的平皿，以调节恒温培养箱的湿度，培养5天。培养完成后，在培养温度下记录滤膜上的菌落数。稀释度可根据样品的污染情况选择。用无菌吸量管吸取样品25ml，加入225ml无菌蒸馏水中，制成1：10稀释液；用无菌吸量管吸取1：10稀释液25ml，加入225ml无菌蒸馏水中，制成1：100稀释液。稀释后样品检测方法同上。培养结束后，记录滤膜上的菌落数，按相应稀释度计算。4 数据处理结果报告10ml浓缩清汁样品所含菌落数，报告单位为cfu/10ml。结果报告150ml清汁（或水）样品所含菌落数，报告单位为cfu/150ml。
结果报告为20ml浑浊汁样品中所含菌落数，报告单位为cfu/20ml。参考：库克实验室耐热耐酸菌检测方法。显微技术显微技术显微技术是微生物检测技术中最常用的技术之一。显微镜的种类很多，实验室常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。在食品微生物检测中，最常用的是普通光学显微镜。一、普通光学显微镜的构造及基本原理：1、构造：光学显微镜由光学放大系统和机械装置两部分组成。光学系统一般包括目镜、物镜、聚光镜、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、载物台、镜臂和底座等。（图3-1）标本的放大主要由物镜完成。物镜的放大倍数越大，其焦距越短，焦距越小，物镜与载玻片之间的距离（工作距离）就越小。油浸物镜的工作距离很短，使用时要特别注意。目镜只起放大作用，而不能提高分辨力，标准目镜的放大倍数为十倍。聚光镜使光线照射到标本上后进入物镜，形成大角度的光锥，因此提高物镜的分辨力是十分重要的。聚光镜可上下移动以调节光线的亮度，可变光圈可调整入射光束的大小。显微镜的光源可以是自然光，也可以是灯光，以灯光为佳，因为灯光的颜色和强度容易控制。普通显微镜用普通灯光即可，高品质的显微镜必须使用显微镜灯光才能充分发挥其性能。
有些需要强照明的场合，如暗场照明、摄影等，常采用卤素灯作光源。 图3-1 光学显微镜结构图 2、原理： 显微镜的放大效率（分辨率）是由所用光线的波长短小和物镜的数值孔径决定的。缩短所用光线的波长或增大数值孔径，都可以提高分辨率。可见光的波长相对较窄，紫外光的波长较短，虽能提高分辨率，但肉眼不能直接观察，所以，缩短光线的波长来提高光学显微镜的分辨率是有限的。增大数值孔径是提高分辨率的理想措施。要增大数值孔径，可增大介质的折射率，以空气为介质时，折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，与载玻片的折射率（1.52）接近。这样，光线不经折射便可直接穿过载玻片和香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显微镜的总放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，物镜的放大倍数越高，分辨率就越高。二、普通显微镜的使用方法1、低倍观察先将低倍物镜的位置固定，然后安放标本，转动反射镜，调好光线，将物镜抬起，再向下调节至可见标本为止，然后用微调对焦进行观察。除少数显微镜外，应将聚光镜置于最高处，若视野内出现外界物体的像，可稍稍降低聚光镜，像便会消失。应将聚光镜下方的光圈调节至适当大小，以控制入光量，增大明暗差。2、高倍观察显微镜一般设计为共焦的。
低倍显微镜对焦后换上高倍显微镜基本上也对焦了，只要微调一下即可。有些简易显微镜不是共焦的，或因更换物镜达不到共焦，需将高倍物镜往下移再往上调焦，光圈应调大，使之能形成足够的光锥角。稍稍上下移动聚光镜，观察图像是否清晰。3、用油镜观察油镜工作距离很小，需防止损坏载玻片上的镜片和物镜。使用时一般是经低倍、高倍转油镜，当高倍物镜对准标本后，加油镜进行观察。也可直接用油镜观察载玻片标本，而无须经过低倍、高倍物镜。显微镜有自动止动装置。载玻片上油后，将油浸显微镜往下移入油滴中，直至油滴停止下落，再用微调向上调整焦距。若无自动止滴装置，调焦的方法是站在显微镜侧面观察，将油浸显微镜往下移，直至稍接触载玻片，再用微调向上提调焦距。使用油浸显微镜时，载物台应保持水平，以防油流出。油浸显微镜所用油应清洁，聚光镜应升至最高处，聚光镜下方的光圈应放大，否则会减小数值孔径，影响分辨率。无论用油浸显微镜还是高倍显微镜观察，都建议使用可调式显微镜灯作为光源。3、普通显微镜的维护显微镜是精密贵重仪器，必须妥善保养。显微镜使用完毕后，应放回原显微镜盒或柜内，并注意以下事项：1.观察完毕后，取下观察过的载玻片标本。
2、如果曾使用过油浸镜头，应先用镜头纸擦去镜头上的油污，再用镜头纸蘸取二甲苯擦拭2-3次，最后用镜头纸擦去二甲苯。3、转动物镜转换器，置于低倍位置。4、将镜体放低至最低位置，调整载物台上标本移动器的位置，盖上防尘罩。镜头的保护最为重要，镜头应保持清洁，只能用柔软、无短绒的镜头纸擦拭，镜头纸应放在纸盒内，以防灰尘。千万不要用手帕或纱布擦拭镜头。必要时可用溶剂清洁物镜，但要小心防止固定镜头的粘合剂溶解。视不同的粘合剂，可选择不同的溶剂，如酒精、丙酮、二甲苯等，其中二甲苯最安全。方法是用脱脂棉球沾取少量二甲苯，轻轻擦拭，立即用镜头纸将二甲苯擦去，再用擦耳球吹去可能残留的短棉绒。目镜是否干净可以在显微镜下检查。转动目镜，如果在转动时能看到视野内有斑点，说明目镜沾染了污物，可以用镜头纸擦拭与目镜相连的镜头，如仍取不下来，则再擦拭下面的镜头，用擦耳球吹去短棉绒。擦拭目镜或因其他原因取下目镜时，要用镜头纸盖住镜筒口，防止灰尘进入镜筒，落在镜筒下面的物镜上。4、显微计数用血球计数板直接在显微镜下计数，是计数微生物总数的常用方法。由于对置玻片和盖玻片之间的体积是恒定的，因此可以根据显微镜下观察到的微生物数量来计算单位体积内的微生物总数。
血细胞计数仪是一种特殊的载玻片，载玻片上有两个方格，每个方格分成9个大方格，中间的大方格用于微生物计数，所以又称计数板。计数板的尺度一般有两种，一种是每个大方格分成16个中方格，每个中方格分成25个小方格；另一种是将一个大方格分成25个中方格，每个中方格分成16个小方格。不管哪一种，都将一个大方格均等地分成（25×16或16×25）400个小方格。（图3-2）因每个大方格边长为1mm，而载玻片与盖板距离为0.1mm，所以每个计数板（1个大方格）的体积为0.1mm3。 图3-2 两种血细胞计数玻片 a. 25X16计数玻片 b. 16X25计数板通过测定每个方格中的细菌数，可算出一个大方格中的细菌数，从而可算出1ml细菌液中所含细菌数。当一个大方格由16个方格组成时，应数4个角上的4个方格（即100个小方格）中的细菌数。当一个大方格由25个方格组成时，除数4个角上的4个方格中的细菌数外，还应数中间方格（即80个小方格）中的细菌数。计算公式如下： 16×25计数板：细菌总数/ml=×400×10000×稀释倍数=每个小方格中细菌数×4×106×稀释倍数 25×16计数板：细菌总数/ml=×400×10000×稀释倍数=每个小方格中细菌数×4×106×稀释倍数 染色技术 染色技术 由于微生物细胞内含有大量的水分（一般在80-90%以上），对光的吸收和反射与水溶液相差不大，与周围背景无明显的明暗差别。
因此，除观察活的微生物细胞的运动能力和直接计数菌体数目外，多数情况下必须对其进行染色后才能在显微镜下观察。然而任何技术都不是十全十美的，染色后的微生物标本都是死的，在染色过程中，微生物的形态和结构会发生一些变化，不能完全代表其活细胞的真实情况，染色观察时必须注意。本节包括四部分：1、染色的基本原理微生物染色的基本原理是借助物理和化学因素进行的。物理因素包括毛细现象、渗透、细胞及细胞物质对染料的吸附等。化学因素则是根据细胞物质与染料的不同性质而发生的各种化学反应。酸性物质对碱性染料较容易吸附，且吸附效果稳定；同样，碱性物质对酸性染料较容易吸附。例如酸性物质的细胞核对碱性染料有化学亲和力，易于吸附。但要使酸性物质能染色酸性物质，必须改变其物理形态（如改变pH值），以利于吸附的发生。相反，碱性物质（如细胞质）通常只能被酸性染料染色，若改变其为合适的物理形态，也能被碱性染料吸附。细菌的等电点较低，pH值约为2-5。因此，在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌蛋白质电离后带负电荷；而碱性染料电离后带正电荷。因此，带负电荷的细菌常常和带正电荷的碱性染料结合。
因此，在细菌学染色中常采用碱性染料。影响染色的其他因素还有细菌细胞的结构及其外膜的通透性，如细胞膜的通透性、膜孔的大小、细胞结构是否完整等。此外，培养基的成分、菌序、电介质含量以及染色液中的pH、温度、药物的影响等，也可影响细菌的染色。 2、染料的种类与选择 染料分为天然染料和人工染料。天然染料有胭脂红、地衣红、石蕊、苏木精等，多是从植物中提取的，成分复杂，有些成分至今尚未搞清楚。目前主要使用人工染料，又称煤焦油染料，多是从煤焦油中提取的，是苯的衍生物。大多数染料是有色的有机酸或碱，难溶于水，但易溶于有机溶剂。为了使它们易溶于水，通常将它们制成盐。根据电离后染料离子所带电荷的性质，染料可分为四类：酸性染料、碱性染料、中性（络合）染料和简单染料。1、酸性染料：该类染料电离后染料离子带负电荷，如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸和酸性品红等，能与碱性物质结合生成盐。当培养基因糖分解产酸使pH值降低时，菌体所带的正电荷增多，此时选用酸性染料，容易染色。2、碱性染料：该类染料电离后染料离子带正电荷，能与酸性物质结合生成盐。微生物实验室常用的碱性染料有亚甲蓝、甲基紫、结晶紫、碱性品红、中性红、孔雀绿、番红花等，一般情况下，细菌容易被碱性染料染色。
3.中性（化合物）酸性染料和碱性染料的组合称为中性（化合物）染料，例如's（）（）染料和Gimsa染料，后者的染料通常用于染色的细胞核。 o不溶于水的化合物，但可溶于脂肪溶剂，例如紫色（）染料。3。滑动制备的基本程序，并且染色有许多用于染色微生物的方法，并且在各种方法中使用的染料也有所不同，但通常需要进行染色和染色手术程序。 1.准备：将一滴蒸馏水滴在干净的载玻片上，使用接种回路进行无菌操作，挑选少量培养物，将其放在水上，将其与水混合以制成悬浮液，然后将其涂在薄层中，并用直径过多，以避免过度的镜头，以避免使用过多的玻璃，以置于隔离范围。从施加的细菌溶液中，将其稀释在水滴中，如果材料是液体培养物或固体培养物，则将其涂在薄层中。有时，为了使其更快地干燥，标本可以朝上，将玻璃滑梯的两端固定在稍微上面，并在酒精灯上方稍微加热，以蒸发水，但不要靠近火焰或加热太久，以防止样品燃烧和固定。 URES。
2）确保细菌可以更牢固地粘附，以防止样品被水冲走3），因为染料对细胞的渗透性更容易染色。灯在不时加热幻灯片的情况下，触摸皮肤的情况不得太热。最常用的用于化学固定的固定剂是：酒精（95％），半酒精和半乙醚，1-2％的饥饿酸等。饥饿的酸可以固定细胞而不会改变其结构，因此更常用的是使用固定细胞的技术。湿的样品在玻璃上涂抹，然后覆盖培养皿，在1-2分钟后将样品从培养物中取出，并固定染色的样品。带有样品）应浸入染料中。如果进行复合染色，则在媒体处理期间，染料和染料形成一种不溶性化合物，可以增加染料和细菌的亲和力。
通常，在固定后进行染色，但可以与染色或酸染色的细胞相结合。这与未定型的部分形成了鲜明的对比，这是红色的，含有碳纤维的染色。 ，干燥样品，或使用吸收纸吸收多余的水，然后用轻微的热量干燥或干燥。当使用吸收纸时，请勿将幻灯片擦掉。分为两种类型：前者使用一种染色，用于染色的微生物，但双染色使用了两个或多个染色。 Ella，细胞核等）通常用于食品微生物检查中。
1.单染色的染料染色，易于使用，适用于对正常情况的形态学观察使用IC染料，通常会使用酸性染料时，使用酸性染料，染料染料的pH值降低，以使其强烈酸性（细菌细胞的同色点），以使细胞有效地固定五个步骤。以染料结尾：碳酸谷辛染色解决方案：快速染色，短时间和细胞是红色的。甲基蓝色染色：较慢的染色，清晰的效果和细胞是蓝色的晶体晶体染色溶液：快速染色，深染色和细胞是紫色的。然后，在某些条件下，某些细菌不脱色，而其他细菌则可以分成两类，而前者则被称为革兰氏式细菌，而后者则是革兰氏阴性细菌的次数仍然是紫色的，而阴性细菌染成红色。带有孢子和大多数球菌的细菌，以及所有的放线菌和真菌呈阳性恐怖反应；
革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌在化学成分和生理特性上有许多差异，并且染色反应通常是不同的。染料很差，这是染色反应的主要基础。强碱性条件，两种类型的细菌吸附了许多碱性染料，并且在pH值非常低时会显示出阳性反应。此外，两种类型的细菌对晶体 - 碘复合物的渗透性也不一致。脱色，重新染色的方法是：1）用小菜一碟涂抹1分钟。水并吸收水。 7）用溶液（稀释）染色10秒，然后用自来水冲洗并在显微镜下检查。
灭菌和消毒灭菌和消毒通常在实际使用中互换使用，但实际上是不同的，但实际上，消毒的方法是指使用消毒剂的方法，是指使用使用物质和化学物质的方法和其他方法来杀死对物体内部和化学症的方法的方法IT IT I.物理方法1.使用灭菌的温度是最常用的，方便的和有效的方法。可以迅速进行消毒，但易于燃烧物品，因此使用范围有限。它仅适用于接种针头，循环，测试管嘴和无法使用的污染项目或实验动物的身体。维持食物的营养和风味，进行消毒以确保食物卫生。
这种方法通常是62°C，可以在30分钟内实现消毒的目的。培养业，食品检测和微生物实验室，由于蒸汽压力的升高，水的沸点也会增加。
在这种情况下，微生物（包括孢子）将在15-20分钟内杀死，否则蒸汽压力与蒸汽温度没有相应的关系，这将大大降低热量的热量。蛋白质或脂肪将改善耐热性。
c。 S，因此是消毒剂的作用，而不是消毒剂。
由于消毒的防腐剂不是选择性的，因此它们不仅可以杀死或抑制致病性微生物，而且对人体组织细胞具有损害影响，因此它们只能用于在某些玻璃中识别玻璃的培训，以便在身体表面上进行消毒。瓶子，食客，杯子和稻草。洗涤后，浓盐酸会注入。几分钟后，倒入盐酸，然后用流动的水冲洗。
如果没有用水洗净的肥皂溶液洗涤的容器。一般而言，它的化学成分相对丰富，微生物是强大的，并且它们具有广泛的配备，因此它们更常用，并且特别适合于培养基的稳定性。
这种类型的媒介是准确的，但是价格昂贵，因此，微生物仅适用于某些科学研究，例如营养和代谢研究，例如，土豆蔗糖培养基础等。液体培养基在实验室中易于控制微生物的生长和代谢状态。
1）在抑制不需要的细菌的培养基中，被称为选择培养基。在一定程度上，增殖的介质也是介质的选择。食物测试中常用的培养基就是一个例子。
此外，根据培养基的营养成分，它们可以分为基本培养基，并且这些培养基主要用于微生物遗传学。根据您自己的目的进行不同的作品。
蒸锅的使用不得与痕量铜或铁混合，以使细菌不容易生长，如果发现培养基无法使用，则应使用较小的材料，因此将其完全溶解在较小的情况下。请注意探索经验，以掌握文化基础的最终pH值，以确保文化基础的质量，必须使用过滤或其他澄清方法来满足此要求。
您还可以在中间使用一层棉花，当您新近过滤时，必须用滤纸过滤滤纸。当琼脂对角线培养基的量不超过容器时，应讨论填料的数量，即在基础平面的2/3层和1/3的含量。
明胶培养基也用于较低的温度灭菌，如果发现它的浸入量，则应仔细检查它。超过3天。1。在实验室或工厂实践中使用工具和方法，使用最常用的接种工具是接种环和接种针头。
有时，滴管也可以用作液体疫苗接种的工具：1）最常用的接种方法。培养基，然后将其冷却到约45°C的固体培养基中，然后迅速摇动，以使细菌溶液达到稀释的目的。
5）涂层与接种略有不同，并将其倒入片剂，以便将其固化，然后将细菌液体倒入片剂中，以使细菌迅速分布在表面上。疫苗接种。
在实验表的顶部，应尽可能减少混合细菌，而周围细菌的疫苗应越少。或纯净的棉花插头在火焰上，分离和纯化含有多个微生物培养物，如果菌落中的所有细胞都来自亲本细胞，则该菌落被称为纯培养。
当识别细菌时，使用的微生物通常是纯培养物，将混合物倒入固化后的无菌用餐中。通过适当的稀释，在固体营养琼脂片上取一定量的稀释液，然后使用无菌玻璃玻璃均匀地将稀释溶液涂在培养基表面上，并且可以通过恒温培养物获得。方法包括对角线方法，曲线法，方形方法，辐射方法，四个网格方法等（图3-6）当接种环在培养基表面移动时，接种环上的细菌液体逐渐稀释，最后将单个细胞散布在刮擦后，每个细胞都会生长成殖民。
( 3-7) 4. The and of and are very . In the same and , after , the last - can grow in the solid . Line 1. 2. Curve 3. 4. 5. Four grid 5. In order to some in the , you can use the test tube with the group as the to heat this test tube in the water for in order to the in the . Sam. After the , the is added to the of the to the with the air. Among the , the of the of is also by many , such as the of , , water, , pH, etc.
微生物的类型是不同的，培养方法和条件不相同。最短的时间。
根据微生物的不同生长温度，它们可以分为三种类型：A.冷微生物：它是-10°C -20°C之间的最合适的生长温度：最合适的生长温度通常是20°C和45°C。 ISM需要呼吸。
c。厌氧菌的生长。用碳驱动氧气；使用氮气驱动氧气；
2) to the state of the base, it can be into two : solid and . Under , it is also an for for . sex, the of on the , and to and to the of . In terms of , the have a .因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。（图３－８）图３－８细菌的培养特征1.点状2.圆形3.丝状4.不规则形5.假根状6.纺锤状7.扁平8.隆起9.凸起10.垫状11.脐状12.边缘整齐13.波状14.裂片状15.啮蚀状16.丝状17.卷发状18.丝线状19.刺毛状20.串珠状21.疏展状22.树根状23.假根状24.丝状25.串珠状26.乳头状27.绒毛状28.树根状29.量杯状30.萝卜状31.漏斗状32.囊状33.层状34.絮状35.环状36.蹼状37.膜状２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。二、生理生化试验微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。微生物检验中常用的生化反应有：１、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力、培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。２、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20°培养5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。３、VP试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。试验方法：１）O'Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O'Meara试剂（加有0.3%肌酸或肌酸酐的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。２）氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚（2-na-）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
３）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。４、甲基红（ Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4~6.0，其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。
５、靛基质（）试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管，于36±1C培养24h时后，取约2ml培养液，加入氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性，或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。实验证明靛基质试剂可与17种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。６、硝酸盐（）还原试验有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。试验方法：临试前将试剂的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α－萘胺乙醇溶液）试液各0.2ml等量混合、取混合试剂约0.1ml、加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面，立即或于10min内呈现红色即为试验阳性，若无红色出现则为阴性。用α-萘胺进行试验时，阳性红色消退很快、故加入后应立即判定结果。
进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照。α-萘胺具有致癌性、故使用时应加注意。７、明胶（）液化试验有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。试验方法：挑取18~24h待试菌培养物，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于36±1℃。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性。平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10~20min后，菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。８、尿素酶（）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养10，60和，分别观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。
培养2，4和24h分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。９、氧化酶（）试验氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者氏试剂呈粉红色~深紫色，Ewing氏改进试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验结果。10、硫化氢（H2S）试验有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中，沿管壁穿刺接种，于36±1℃培养24~28h，培养基呈黑色为阳性。阴性应继续培养至6天。也可用醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤，再将醋酸铅纸条悬挂于培养基上空，以不会被溅湿为适度；用管塞压住置36±1℃培养1~6天。纸条变黑为阳性。11、三糖铁（TSI）琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃