微生物种类繁多,既有有益的,也有有害的,广泛涉及食品、医药、工农业、环境保护等多个领域。只有有效地进行微生物检测,测定微生物的含量,才能采取有效措施,保护人们的健康免受微生物的危害。
微生物检测方法
1、电子计数器计数方式
电子计数器的工作原理是测量小孔内液体的电阻变化。小孔只能穿过一个细胞。当细胞通过小孔时,电阻显着增加,形成脉冲,自动记录在电子记录装置上。
该方法测量结果较为准确,但仅识别颗粒大小,无法区分是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含有任何碎片。
2. 计数器测量方法
即,使用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室中,用显微镜观察并计数。
由于计数室的体积是恒定的(0.1mm3),因此可以根据计数刻度内的细菌数量计算出样品中的细菌数量。该方法简单易行,可立即得出结果。它不仅适用于细菌计数,还适用于酵母菌和霉菌孢子的计数。
3. 比浊法
比浊法根据细菌悬浮液透射的光量间接测定细菌的数量。菌悬液的浓度在一定范围内与透过率成反比,与光密度成正比。因此,可以采用光电比色计来测量菌液,并用光密度(OD值)来表示样品菌液的浓度。
该方法简单、快速,但只能检测含有大量细菌的悬浮液并获得细菌的相对数量。此方法不能用于测定颜色太深的样品。
4.测定细胞的总氮或总碳含量
氮和碳是细胞的主要成分,其含量相对稳定。测量氮和碳的含量可以推断细胞的质量。该方法适用于较高浓度微生物的检测。
5. 活细胞计数方法
常用的平板菌落计数方法是根据每个活细菌都能生长一个菌落的原理设计的。取一定体积的菌悬液,进行一系列倍倍稀释,然后将定量稀释液在平板上培养。根据培养菌落的数量,可以计算出活细菌的数量。
该方法灵敏度高,是一种检测活污染细菌数量的方法。也是目前世界上许多国家采用的微生物检测方法。使用该方法时,请注意:
① 一般选择菌落数在30~300之间的平板进行计数。菌落过多或过少都会不准确;;
②为防止菌落扩散,影响计数,可在培养基中添加0.001%2,3,5-氯化三苯基四唑(TTC);
③该方法仅限于形成菌落的微生物。广泛应用于水、牛奶、食品、药品等各种物质的细菌检测,是常用的微生物检测方法。
6. 细胞重量测定方法
该方法分为湿重法和干重法。对于湿重法,将单位体积培养物离心并称重湿细菌细胞;干重法是将单位体积培养物离心,用清水洗涤,置于干燥器中,加热干燥失去水分后称重。该方法适用于细菌浓度高的样品,是微生物检测的常用方法。
微生物检测程序
1. 疫苗接种
将微生物转移到适合其生长和繁殖的人工培养基或活生物体的过程称为接种。
2. 分离纯化
含有一种以上微生物的培养物称为混合培养物。如果一个集落中的所有细胞都来自一个亲代细胞,则该集落称为纯培养物 ()。
鉴定菌株时,一般要求所使用的微生物是纯培养物。获得纯培养物的过程称为分离纯化,方法有很多种。
3. 栽培
1、根据培养时是否需要氧气,可分为需氧培养和厌氧培养两大类。
2、根据培养基的物理状态可分为固体培养和液体培养两大类。
4. 常规识别技术
(一)形态结构及培养特性观察
(二)生理生化检测
(3)化学成分分析
5. 微生物的保存
其基本原理是在选择优良纯种的基础上,人为创造有利于休眠的环境,使其处于休眠状态,使菌株在长期保存后仍能保持原有的优良性状。基本措施是低温、真空、干燥。
来源 |中科检测技术
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